Abstrait
Parallèlement aux techniques de microscopie optique visant à visualiser directement la séparation de phases, il est nécessaire de surmonter les limitations de la microscopie de fluorescence, où l'ajout de fluorophores peut perturber significativement l'organisation lipidique. L'imagerie optique Raman est un outil analytique prometteur pour la microscopie chimiquement spécifique sans marquage des bicouches lipidiques. Dans ce travail, nous démontrons l'application de la microscopie de diffusion Raman cohérente hyperspectrale, combinée à une méthodologie d'analyse de données quantitative non supervisée développée en interne, pour visualiser la séparation des lipides dans des bicouches membranaires planes uniques présentant des domaines liquides ordonnés et désordonnés. Deux instruments conçus en interne ont été utilisés, intégrant les modalités de diffusion Raman anti-Stokes cohérente et de diffusion Raman stimulée. Des mélanges ternaires de dioleoylphosphatidylcholine, de sphingomyéline et de cholestérol ont été utilisés pour former des domaines à phases séparées. Nous démontrons que les domaines sont résolus de manière cohérente, tant chimiquement que spatialement, sans aucun marquage. Les spectres de susceptibilité Raman quantitatifs des domaines sont fournis, ainsi que leurs cartes de concentration spatialement résolues.
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