Effets des fixateurs sur l'organisation moléculaire de la myéline étudiés par microscopie RP-CARS

Abstrait

Lorsque l'imagerie en temps réel n'est pas possible, la fixation d'échantillons permet de préserver l'ultrastructure des échantillons biologiques en vue d'analyses microscopiques ultérieures. Ce processus peut être réalisé par différentes méthodes, chacune affectant différemment la structure biologique de l'échantillon. Si ces altérations ont été bien caractérisées par microscopie traditionnelle, peu d'informations sont disponibles sur les effets des fixateurs sur l'orientation moléculaire spatiale du tissu biologique. Nous avons abordé cette question en utilisant la microscopie de diffusion Raman anti-Stokes cohérente à polarisation rotative (RP-CARS) pour étudier les effets de différents fixateurs sur l'ordre moléculaire submicrométrique et la morphologie micrométrique de la myéline. La RP-CARS est une technique novatrice dérivée de la microscopie CARS qui permet d'étudier l'orientation spatiale des liaisons moléculaires tout en conservant la sélectivité chimique intrinsèque de la microscopie CARS. En caractérisant les effets des procédures de fixation, ce travail constitue un guide utile pour le choix de la ou des meilleures techniques de fixation, en particulier pour la microscopie CARS à résolution de polarisation. Enfin, nous montrons que la combinaison de paraformaldéhyde et de glutaraldéhyde peut être utilisée efficacement comme fixateur pour la microscopie RP-CARS, à condition de prendre en compte les effets sur la distribution spatiale moléculaire, caractérisés ici.