Abstrakt
Die Zwei-Photonen-Anregungsmikroskopie ist eine der wichtigsten Techniken zur Beobachtung dreidimensionaler (3D) Strukturen in biologischen Proben. Wir nutzten einen Laserstrahl im sichtbaren Wellenlängenbereich zur Zwei-Photonen-Anregung in einem Multifokus-Konfokalmikroskop, um die räumliche Auflösung und den Bildkontrast in der 3D-Lebendzellmikroskopie zu verbessern. Experimentelle und numerische Analysen zeigten eine verbesserte axiale Auflösung für einen breiten Bereich von Lochblendengrößen bei der konfokalen Detektion. Wir beobachteten die 3D-Bewegungen des Golgi-Apparats in lebenden HeLa-Zellen mit einer Bildgebungsgeschwindigkeit von 2 s pro Volumen. Zudem bestätigten wir, dass die Zeitrafferaufnahmen bis zu 8 min keine signifikanten Zellschäden in Zwei-Photonen-Anregungsexperimenten mit Wellenlängen im sichtbaren Lichtbereich verursachten. Diese Ergebnisse demonstrieren, dass die Multifokus-Zwei-Photonen-Anregungsmikroskopie mit sichtbarem Licht eine einfache Technik zur 3D-Visualisierung lebender Zellen mit hoher räumlicher Auflösung und hohem Bildkontrast darstellt.
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