Abstrakt
Die korrelative Licht-Elektronen-Mikroskopie (CLEM) erfordert robuste Sonden, die sowohl im Licht- als auch im Elektronenmikroskop sichtbar sind. Hier demonstrieren wir einen CLEM-Ansatz, der kleine Goldnanopartikel als einzelne Sonde nutzt. Einzelne, an den epidermalen Wachstumsfaktor gebundene Goldnanopartikel wurden mittels resonanter Vierwellenmischung (FWM) lichtmikroskopisch mit nanometrischer Präzision und ohne Hintergrundrauschen in menschlichen Krebszellen lokalisiert und hochpräzise mit den entsprechenden Transmissionselektronenmikroskopie-Bildern korreliert. Wir verwendeten Nanopartikel mit Radien von 10 nm und 5 nm und zeigen eine Korrelationsgenauigkeit von unter 60 nm über eine Fläche von mehr als 10 µm², ohne dass zusätzliche Referenzmarken erforderlich sind. Durch die Reduzierung systematischer Fehler konnte die Korrelationsgenauigkeit auf unter 40 nm verbessert werden, während die Lokalisierungsgenauigkeit unter 10 nm liegt. Polarisationsaufgelöste FWM korreliert mit der Form der Nanopartikel und ist vielversprechend für das Multiplexing durch Formerkennung in zukünftigen Anwendungen. Aufgrund der Photostabilität von Goldnanopartikeln und der Anwendbarkeit der FWM-Mikroskopie auf lebende Zellen eröffnet FWM-CLEM eine leistungsstarke Alternative zu fluoreszenzbasierten Methoden.
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