Abstrakt
Die Fluoreszenzanisotropie der Photosensibilisatoren Radachlorin und Chlorin e6 wurde mittels zeitaufgelöster Einzelphotonenzählung unter Ein- und Zweiphotonenanregung im Soret-Absorptionsbereich untersucht. Unter Einphotonenanregung wurde in der Nähe des Absorptionsmaximums im Wellenlängenbereich von 395–405 nm eine sehr geringe negative Anisotropie beider Photosensibilisatoren beobachtet. Die Zweiphotonenanregung der Photosensibilisatoren im gleichen Spektralbereich zeigte hingegen eine hohe Fluoreszenzanisotropie mit einem Maximalwert von etwa 0,43. Der deutliche Unterschied der Fluoreszenzanisotropieparameter bei Ein- und Zweiphotonenanregung wird auf die unterschiedlichen Symmetrien der Ein- und Zweiphotonen-Absorptionstensoren zurückgeführt, wenn die Komponenten des Zweiphotonen-Absorptionstensors vergleichbare Werte aufweisen. Die Variation der Anregungswellenlängen im Spektralbereich von 375–425 nm zeigte eine nichtlineare Wellenlängenabhängigkeit der Anisotropie von Radachlorin und Chlorin e6 mit entgegengesetzten Tendenzen bei Ein- und Zwei-Photonen-Anregung. Die gewonnenen Daten legen nahe, dass die in FLIM-Experimenten häufig verwendete Ein-Photonen-Anregung bei etwa 405 nm nicht sensitiv genug ist, um die Fluoreszenzanisotropie von Radachlorin und Chlorin e6 zu erfassen, und daher nicht zur Bestimmung der Anisotropie bzw. der Rotationsdiffusionszeit dieser Moleküle geeignet ist. Die Zwei-Photonen-Anregung hingegen ermöglicht eine hohe Fluoreszenzanisotropie und eine genaue Bestimmung der Rotationsdiffusionszeit. Gleichzeitig kann die Ein-Photonen-Anregung bei etwa 405 nm zur präzisen Bestimmung der Fluoreszenzlebensdauer im Rahmen des Standard-FLIM-Schemas verwendet werden, bei dem die Fluoreszenzpolarisation nicht berücksichtigt wird.
Artikel teilen
